Celkweekmedium is de voedingsbasis voor het kunstmatig imiteren van de in vivo groeiomgeving van dierlijke cellen en het handhaven van de overleving en proliferatie van cellen in vitro. een voedingsstof. Dus wat zijn de veelvoorkomende problemen bij het gebruik van celkweekmedium? Laten we een analyse maken.
1. Buffersysteemselectie en pH-verandering van celkweekmedium
Aangezien de optimale pH voor de meeste cellen tussen 7.0 en 7.4 ligt, kunnen afwijkingen van dit bereik schadelijke effecten hebben op de celgroei. De pH-vereisten van verschillende cellen zijn echter niet precies hetzelfde. Primair gekweekte cellen hebben over het algemeen een slechte tolerantie voor pH-fluctuaties, terwijl oneindige cellijnen een sterke tolerantie hebben. Daarom is in de primaire cultuur het buffersysteem in het kweekmedium belangrijker. Het algemene celkweekmedium gebruikt een uitgebalanceerd zoutsysteem, maar verschillende kweekmedia of dezelfde reeks kweekmedia gebruiken verschillende uitgebalanceerde zoutsystemen. De 199-serie en de MEM-serie hebben bijvoorbeeld allemaal het systeemcultuurmedium van Hanks en de systeemcultuur van Earle. baseren. Sommige media zijn niet het bovengenoemde conventionele uitgebalanceerde zoutsysteem, zoals RPMI1640 medium, F12 medium. Het gebalanceerde zoutsysteem van het MEM low serum medium is ook geen conventioneel gebalanceerd zoutsysteem en het bufferend vermogen van het gebalanceerde zoutsysteem is sterker dan dat van het conventionele gebalanceerde zoutsysteem.
cel cultuur
Er zijn veel redenen voor pH-daling tijdens celkweek. Wanneer de cellen erg snel groeien, daalt de pH-waarde meestal snel, wat kan worden opgelost door tijdige passage, verhoging van de passageverhouding of verlaging van het serumvolume. Daarnaast kan de pH vaak snel dalen door te strak aangedraaide dop van de kweekfles, onvoldoende buffercapaciteit van het NaHCO3-buffersysteem, onjuiste zoutconcentratie in het kweekmedium, bacteriële, gist- of schimmelverontreiniging. Op dit moment kunt u het op de volgende manieren oplossen:
1) Verhoog de NaHCO3-concentratie in het kweekmedium of verlaag de CO2-concentratie in de incubator. Wanneer het NaHCO3-gehalte tussen 2,0 g/L en 3,7 g/L ligt, is de overeenkomstige CO2-concentratie 5~10 procent;
2) Schakel over op een CO2-onafhankelijk kweekmedium;
3) Draai de dop van de fles goed los. Voeg HEPES-buffer toe aan het kweekmedium om de uiteindelijke concentratie 10-25 mM te maken;
4) Gebruik de kweekoplossing op basis van Earle's zout in de CO2-kweekomgeving en gebruik de kweekoplossing bereid door Hanks' zout in de atmosferische kweekomgeving;
5) Gooi cultuur weg of steriliseer met antibiotica als besmetting de oorzaak is.
2. Verschillende belangrijke additieven worden vaak gebruikt in celkweekmedia en problemen waaraan aandacht moet worden besteed tijdens het gebruiksproces
Fenolrood wordt gebruikt als pH-indicator in celkweekmedia. Over het algemeen kan de pH-waarde van het medium worden beoordeeld aan de hand van het indicatoreffect van fenolrood, maar het gehalte aan fenolrood in laag serum of serumvrij celkweekmedium verschilt van dat in gewoon celkweekmedium en kan niet worden waargenomen met het blote oog of De pH-waarde wordt empirisch bepaald en het wordt aanbevolen om een pH-meter te gebruiken voor de meting. Fenolrood heeft meestal geen significant effect op de kwaliteit van biologische producten die worden geproduceerd in serumbevattende celkweekmedia en kan ook worden verwijderd door zuiveringstechnieken, maar fenolrood kan een intracellulaire natrium/kalium-onbalans veroorzaken in serumvrije celkweekmedia , die de celgroei beïnvloeden.
celcultuur plaat
Natriumbicarbonaat wordt voornamelijk gebruikt als buffersysteem in celkweekmedium en heeft ook het effect van het reguleren van de osmotische druk. Doorgaans is de aanbevolen hoeveelheid natriumbicarbonaat in de gebruiksaanwijzing van het product een standaard en veilige hoeveelheid, die is verkregen op basis van praktijkervaring op wetenschappelijke basis. Door verschillende cellijnen (stammen) kan dezelfde cel zich echter aanpassen aan verschillende omgevingen (verschillende celtolerantie, enz.), en zijn er regionale verschillen in waterkwaliteit, enz., die ook enigszins kunnen worden gewijzigd in de daadwerkelijke productie proces, maar het gebruik van Degenen die de overeenkomstige tests moeten doen (fysisch-chemische en celproductietests, enz.).
HEPES is een niet-ionische buffer met een goede buffercapaciteit in het pH-bereik van 7,2 tot 7,4 en kan bij hoge concentraties toxisch zijn voor sommige cellen. HEPES-buffer kan worden gebruikt met lage niveaus van natriumcarbonaat (0.34g/L) om de toename in osmotische druk veroorzaakt door de toevoeging van extra HEPES te compenseren. Het veilige concentratiebereik is 10 ~ 25 mmol/L.
Natriumpyruvaat kan worden gebruikt als alternatieve koolstofbron in celkweek, en hoewel cellen de voorkeur geven aan glucose als koolstofbron, kunnen cellen ook natriumpyruvaat metaboliseren in afwezigheid van glucose.
Glutamine is erg onstabiel in oplossing. Het kan worden ontbonden tot 50 procent bij 4 graden gedurende 1 week. Het is het beste om het voor gebruik apart te bereiden, in een koelkast van -20 graden te bewaren en voor gebruik aan het celkweekmedium toe te voegen.
