Het basisproces van PCR-detectie van nieuw coronavirus
1. Monsterafname: Gelijktijdige afname van monsters van de bovenste luchtwegen (inclusief nasopharynx en orofarynx) en onderste luchtwegen (inclusief sputum, tracheaal aspiraat of bronchoalveolaire spoelvloeistof) voor nCoV-detectie door RT-PCR. Waar monsters van de lagere luchtwegen direct beschikbaar zijn: gebruik geschikte PBM voor monsterafname (let op URT-monsters voor voorzorgsmaatregelen voor druppeltjes en blootstelling en LRT-monsters voor voorzorgsmaatregelen in de lucht) Gebruik bij het verzamelen van URT-monsters virusmonsterswabs (steriel polyester of rayon in plaats van katoen) en virustransportmedium. Neem geen monsters uit de neusgaten of amandelen. Voor patiënten met verdenking op nCoV, met name pneumonie of ernstige patiënten, kan een enkel URT-monster de diagnose niet uitsluiten, en het wordt aanbevolen om het aantal URT- en LRT-monsters te verhogen.
2. Nucleïnezuurextractie: nucleïnezuurextractie-instrument of handmatige nucleïnezuurextractie
1), geen instrumenten nodig, gebruik handmatige extractie;
Apparatuur en laboratoriumbenodigdheden die nodig zijn voor nucleïnezuurextractie en monsterisolatie:
biologische veiligheidskabinetten (functies: scheiding van monsters, terbeschikkingstelling van personeel, monsters en milieubescherming),
Desktop high-speed gekoelde centrifuge (functie: snelheid groter dan of gelijk aan 12000 RPM, nucleïnezuuranalyse, enz.),
Lage temperatuur koelkast (functie: opslag van reagens),
Metalen bad, pipet (functie: nauwkeurige dosering),
Gesteriliseerde centrifugebuizen (functie: scheiding van nucleïnezuren, enz.),
Latex handschoenen (functie: anti-vervuiling),
Absoluut ethanol, isopropanol, DNase en RNase vrij water (water niet behandeld met DEPC).
3. Automatisch nucleïnezuurextractie-instrument: (automatische extractie, 32 monsters kunnen eenmaal per 26 minuten worden geëxtraheerd)
De bijpassende voorgeïnstalleerde plaat wordt direct op de machine geladen en verwijderd:
4. Fluorescentie kwantitatieve PCR-detectie:
Benodigde apparatuur en verbruiksgoederen: biologische veiligheidskast (functie: monstervoorbereiding, ter beschikking stellen van personeel, monsters en milieubescherming),
Fluorescentie kwantitatief PCR-instrument (functie: detectie en analyse van PCR-amplificatie),
Desktop high-speed gekoelde centrifuge (functie: snelheid Groter dan of gelijk aan 12000 RPM),
Vriezer met lage temperatuur (monsteropslag bij -86 graden, reagensopslag bij -20 graden en 4 graden),
oscillator, (mix)
Gegradueerde pipettips (functie: nauwkeurig laden), 1-10ul-grootte
Gesteriliseerde centrifugebuisjes (0.5/1.5/2ml),
0,2 ml PCR-buis/plaat van optische kwaliteit (functie: PCR-reactiebuis),
Latex handschoenen (functie: anti-vervuiling).
Nucleïnezuurextractie, configuratie van het reactiesysteem en interpretatie van resultaten zijn onderhevig aan de instructies van de kit.
